人脐带MSC冻存与复苏的方法

在人脐带间充质干细胞飚颇壶颟培养时会经常用到干细胞的冻存与复苏，详细步骤如下：

1.使用胰酶对已经冻存的细蕃乘旰曷胞进行消化处理，并记录相应数据；

2.室温、离心力200g，离心5min，后去除上清；

3.根据细胞的数量情况加入适量的冻存液，控制细胞浓度在1×106~5×106；

4.将已经摇匀的重悬细胞等份加入已经灭菌的冻存管中，封紧瓶盖；

5.把已经封好的冻存管置入冻存盒中，放入-80摄氏度存放；

6.24小时后把-80摄氏度的细胞取出转移到液氮中存放；

7.使用37摄氏度水浴预热人脐带间充质干细胞培养基；

8.将存放于液氮或冰盒中的人脐带间充质干细胞取出并迅速置入37摄氏度水浴快速解冻（半冰半水即可）；

9.在超净台中加入30ml的人脐带间充质干细胞培养基重悬细胞，转移到T-150 细胞培养瓶中；

10.将得到的培养瓶培养于无菌、37摄氏度、5%CO2的培养箱中；

11.培养24小时后，用新鲜的人脐带间充质干细胞培养基给细胞换液。