大鼠神经干细胞的培养方法的具体步骤

1、 实验前准备的试验器具和试剂：高压灭菌细胞培养要用到的器皿：玻璃试管、离心管、玻璃吸管、瓶子、枪头等和各种手术器械。新鲜配置75%酒精。实验前半小时将高压灭菌的所有器械盒放入超净工作台内，紫外线照射至少半小时。如所示，准备这些器具准备在超净工作台上进行紫外消毒。

2、分离海马组织，步骤如下：

3、制备神经细胞悬液，剪碎海马为1mm3大小的组织娄壶狩匈块，用0.25%胰酶(或Accutase)37℃消化2min,终止反应1000r/min离心3min, 弃去胰酶。加入种植液（neuralbasal +2%B27+0.5% L-glutamine），吹打形成细胞悬液。将细胞悬液加入培养皿中( 3ml/皿/30mm)。

4、观察体外培养的神经干细胞的生长发育情况，第一天培养显微镜拍照如下：

5、培养24小时后再在显微镜下观察，如下图所示：

6、培养第四天后，在显微镜下观察，如图所示：

7、培养第7天的，在显微镜下观察，如下图所示：

8、总结一下，从培养当天开始到培养第7天，细胞形态的模式图如下所示：