利用primer5设计引物

1、打开软件，点击File-New-DNA sequence

2、弹出一个新窗口，将核苷酸序列复制到窗口中，之后点击primer

3、再次弹出新的窗口，此时页面上会给出一对引物信息，不过一般这对引物质量不好，根据你设计需要，选择Search，修改引物设计参数

4、确定后，会得到一个search results，里面给出了搜索到的搜有引物的信息，点击每个引物，在primer premier窗口中会显示这个引物的具体信息，除引蹒效罩翔物设计一般需要注意的点以外，还需要注意是否有二级结构和错配

5、选好上下游引物后，点击primer premier中的edit primers，可以得到可复制的引物序列。这样引物就设计唁赋獭狍好了，如果有参考基因组的话，最好在参考基因组中blast一下设计的引物，看是否是单拷贝，这一点很重要