组氨酸营养缺陷型鉴定方法

1、首先，基于hi衡痕贤伎s 菌株只能在含组氨酸的培养基上生长的原因，将下层培养基融化，冷至50C左右，倒人4 个培养皿内，冷凝后倒置过夜制成底层平竣淠仝螃板。从测试菌株及对照菌株斜面各取1环分别装人肉青蛋白陈培养液内，37C培养16~24 h 后离心，取南体并用生理盐水洗涤3 次，然后制成菌悬液[ 浓度(1~2) x 10% /ml]。取4管氧化钠琼脂，融化并冷至45"C 左右，保温，各管加0.1ml 菌悬液，每个菌株做2管,迅速据勾并倒在底层平皿上铺句。在各培养皿背面用记号笔标出1.2.3 三点。

2、然后，翻转平皿，打开皿盖，在1处加组氨酸颗粒，2处加组氨酸一生物素混合液1小滴，3处不加作对照。培养2d观察结果，要求除对照外，其余检测菌株均为组氨酸生物索缺陷型。

3、然后，脂多糖屏障突变(rfa)的鉴定，rfa 突变株的菌体表面脂多糖屏障已遭破害仑喵茏坏，一些大分子可穿过细胞壁和细胞膜而进人菌体并抑制其生长，而野生型不受影响。取肉青鬟焐呖鳝蛋白胨固体培养基，融化后制成4 个底层培养基板,取0.2ml TA100 菌悬液均匀徐抹在平板上，每菌做2皿。待室温干燥后，在中央放一直径6mm无菌的厚滤纸片，在其上滴加结晶紫0.02ml.37C培养2d后观察结果。若滤纸片周围出现抑菌圈，直径>14 mm，说明rfa突变。

4、然后，抗药性因子(R)鉴定，取肉膏蛋白胨固体培养基在两个平皿内制成平板。冷凝后在平板的中央加氨卡青霉素液0.01ml，并用接种环将青霉素液涂开成一直线，置温箱或室温下待F。在1、2两皿分別取TA1537.TA100及S CK各一环，划过氨苄青霉素带并于之垂直方向划线，做两皿重复。37C培养16~24h观察结果。含R因子者在划线部分可生长。R因子的性状易于丢失，故应经常鉴定。

5、然后，UV修复缺失(uvrB)鉴定，取肉膏蛋白胨固体培养基融化后，倒人4 个培养皿制成平板，冷凝后用记号笔作好记号标记。分别取TA100及S-CK两个菌株在平板上平行划线，做两个重复。将平皿放紫外灯(15~20W.30~-40cm) 下，打开皿盖，用无菌黑纸遮盖半个平皿，将划线处露出一半，打开紫外灯，照射10~20s.照射完毕。

6、最后，取出并盖上皿道.37C增养16-~2 h观察结果。UV修复缺失的菌株经照射后不能生长，但有黑纸遮盖部分可生长。待测样品致突变性检测，的洲风用品满法或移人法进行，但每次实验均应同时设对照以使比较结果。