western blot步骤

1、收集蛋白样品(Protein sample preparation）；使用细胞裂解液，对贴壁细胞、悬浮细胞或者组织样品进行裂解。之后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。

2、在收集的蛋白样品中加入适量的浓缩SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。用5X的SDS-PAGE蛋谷笆葆回白上样缓冲液可以减小上样的体积，在相同的体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。

3、冷却到室温后，把蛋白样品直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。 便于观察电泳效果和转膜的效果，以及判断蛋白分子量的大小，最好使用预染蛋白质分子量标准。

4、电泳时通常推绡诉诿旬荐在上层胶时使用低电压的恒压电泳，而在溴酚蓝进入下层胶时使用高电压的恒压电泳。对于Bio-Rad的标准电泳装置或者类似炼蓄晦擀电泳装置，低电压可以设置在80-100V，高电压可以设置在120V左右。

5、为了电泳的方便起见，可以采用整个SDS-PAGE过程恒压的方式，通常我们把电压设置在 100V，然后设定定时时间为90－120分钟。