亲和层析中小柱子预实验的具体步骤

1、首先，自制的简易柱子，直径约为1cm，长度约为2cm，在柱子的下端加入蒸馏水，并关闭柱子的出口。

2、然后，将琼脂糖凝胶倒入柱子，让填料自然沉降，依次用二到五倍的柱子体积的无菌水、8mol/L的尿素、无菌水洗柱子。

3、然后，缓慢加入5ml的硫酸镍，至柱子的颜色由白色变为蓝色，待蓝绿色收集液体滴下来为止。

4、然后，用二到五倍体积的PBS缓冲液平衡柱子，再将粗蛋白样品进行上样，用梯度浓度猱蝰逾鸾50mmol/L、70mmol/L、150mmol/L、250mmol/L咪唑进行过柱，流速约为1ml/min。

5、然后，以每个浓度用1.5ml的Eppendorf收集八管，再用二到五倍体积的无攵沲跖演菌水洗柱子，再用二到五倍的50mmol/L的EDTA洗柱子，除去NiSO4，待至无色状态。

6、最后，用多倍体积的无菌水进行洗柱子，将手机液10%的分离胶进行SDS—PAGE分析。