CellTrace™ CFSE 细胞增殖试剂盒操作步骤

CFSE (carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester 羧基荧光素双乙酸盐，琥洌挢刳瓜珀酰亚胺酯) 被动散进入细胞，其本身是无色无荧光的，被细胞内的酯酶分解后产生高强度的荧光，该荧光产物与胞内氨基结合长时间留存于细胞内并可被乙醛固定。未结合的试剂与副产物扩散至胞外基质中，被洗去。 传代或胚胎分裂分析， CFSE与赖氨酸侧链或其他氨基基团反应，共价偶联至细胞内和细胞表面蛋白，细胞分裂时被平均分配至子代细胞，荧光强度降到母代细胞的一半。适合用于胞内示踪，在细分裂或融合后分配至子代细胞中，并不会被转移至邻近的细胞。 在小鼠淋巴细胞迁移实验中， CFSE注射进入小鼠体内后，标记的淋巴细胞的检测可长达8周。肝注射荧光显微镜定位检测可长达20天。

工具/原料

CellTrace™ CFSE (Component A), 10瓶，每瓶50 μg

DMSO (Component B), 0.5 mL

使用浓度：

1、一般来说，长时间染色（超过三天）或快速分裂为5～10uM，活力分析等短时间分析为0.5～5uM。 ，荧光显微镜为25uM。优化并使用尽可能低的浓度以保持细胞的正常生理状态。

试剂准备：

1、用前制备CFSE的5mM贮存液，一瓶A溶于18ul DMSO（ B）中。

流式分析：

1、已用于检测B细胞和T细胞的分裂。用前准备：样本制成单细胞悬液；含0.1%BSA的PBS； 5mM的CFSE贮存液；细胞培养基；

2、飒劐土懿重悬细胞于预温的PBS/0.1%BSA，浓度1× 106/ml注意：为保证标记均匀，样本需为单细胞悬液。细胞浓度为105~106,依标记后细胞的培养时间洹彭岣啬而定。需传代培养，浓度增加为1～5× 107。

3、 坡庥汩赴每ml细胞中加入2ul CFSE贮存液，终浓度为10uM。注意：最适工作浓度需优化，所以用前可用DMSO对贮存液进一步稀释，工作浓度的范围在0.5–25uM之间。

4、37℃孵育30min。

5、加入5倍体积的冷培养基，终止染色。

6、冰上孵育5min。

7、离心沉淀细胞。

8、 用新鲜培养基洗3次。

9、 细胞置于条件合适的培养基或传代培养基中。

10、收集细胞，进行其他染色。

11、流式488nm激发光检测。