人间充质干细胞培养方法

1、在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到90%，即可传代。

2、在超净台/安全柜中，吸掉原有培养基，加入PBS溶液清洗一次，加入Xeno-Free扭箧别砷细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底。

3、室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。

4、加入消化液2倍体积的人间充质干细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。

5、将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min。

6、弃上清，加入人间充质干细胞培养基，重悬细胞，计数。1：3-1：4比例传代，或按1-2x104 cells/cm2 传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于37℃，5%CO2 培养箱中培养。