烟草总DNA 的提取方法

2025-04-19 21:22:01

1、首先,在超净工作台,分别无南剪取转化和木转化的烟草植株幼嫩叶片约0.1~0,5g,在液氮中充分研磨成细粉。

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2、然后,加人800 川l 新鲜配制的DNA 提取液,轻柔颠倒数次,使其全部悬浮。

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3、然后,在65摄氏度下水浴温育20 min,每5 min 混匀1次, 加人250 ul 预冷的5 mol/L,的醋酸钾,立即混匀,置于冰上5 min。

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4、然后,以12 000 r/min 的转速,离心5 min,将上清液移至另一干净什置葆鸳离心管中,用等体积的氯仿/异戊醇抽提一次,以13 000 r/min 的转速,离心5 min。

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5、然后,将上清液移至另一干净离心管中,加人0.6 倍体积的异丙醇,快速混匀10次以上,冰上放置10 min。

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6、然后,在4摄氏度下,以12 000 r/min 的转速,5 min,弃去上清液, 用预冷的70%(V/V)乙醇洗涤沉淀1次。

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7、最后,在完全干燥后,溶于30pl 含0.1mg/ml RNase 的灭菌双蒸水中,低温保存备用。

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