为什么Western Blot发光(ECL)会出现高背景

如何解决Western Blot化学发光(ECL)出现的高背景？

如何解决Western Blot化学发光(ECL)出现的高背景？

1、抗体浓度过高，洗涤不充分，可以造成抗体在膜上的非特异结合，导致高背景。可通过降低诠译邻词抗体稀释度，增加洗膜次数和Buffer用量，或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20加以改善。

2、封闭不充分，会造成抗体在膜上的非特异结合，导致高背景。可通过4℃封闭过夜或增加封闭液中的蛋白浓度加以改善。

3、使用了不恰当的封闭剂，可尝试不同的封闭剂。

4、曝光过度，可减少底物显色时间，缩短曝光时间。

5、操作过程中膜干了。确保膜完全浸没于buffer中，始终杜绝膜干。

6、发光液质量问题。可选用优质的发光试剂，比如Enlight等。