即用型肿瘤细胞冻存液操作步骤

1、培养皿或培养瓶中细胞按常规方法消化，或分离获得肿瘤细胞后，收集于离心管中。

2、使用离心机离心，去除上清，收集细胞沉淀。

3、根据细胞生长密度加入适量的细胞冻存液进行重悬，充分混匀（推荐冻存密度为 1-2x10的6/ml）。

4、将细胞悬液分装至冻存管中，直接放置于-80°C 冰箱保存。24 小时后可移入液氮长期保存（可选）。

5、细胞复苏流程如下：从-80°C 冰箱或液氮罐中取出细胞。

6、迅速放入37°C 水浴，并不时摇动，在3分钟之内使其完全融化。

7、在冻存管中加入少量完全培养基，再将细胞混合液移入含有该细胞完全培养基的离心管中，样弗辞肛胰品和培养基比例为1：10，然后轻轻吹打，混合均匀。

8、离心后去除上清，收集细胞沉淀。

9、轻轻弹松细胞沉淀，加入适量培养液后接种于培养瓶或培养皿中，轻轻晃动使细胞分布均匀，置于37℃孵箱中培养。