M13 噬菌体铺板方法

1、首先，将倒好的雉搽妤粲LB平板倒置放在48"C恒温烘箱中平衡，准备装有3 ml 融化的LB 上层琼脂糖/琼脂的无菌试管，试管在48C水浴中保温。

2、然后，取5~10 ng的M13mp18/19 DNA溶液加入含50pl，在上述步骤中制备的感受态细胞中，进行混匀，并在冰浴30 min。

3、然后，在42C热激90 s，迅速冰浴2~3 min，加入400 pl LB液体飚颇壶颟培养基，37C水浴温育45 min，加入200 ul 上述步骤所制备的铺板细菌，进行摇匀。

4、然后，在装有上层琼脂糖/琼脂的试管中分别加入2% X-gal 溶液40 pl 和20%IPTG 溶液4 pl。

5、然后，将上述步骤所制备的感染培养物倒入上层琼脂中，振荡混匀后，快速倒人已平衡好的LB 平板上，转动平板使上层琼脂糖/琼脂和菌体分布均匀。

6、最后，盖上平皿，室温放置5 min，使上层琼脂糖/琼脂凝固，平板倒置放于37摄氏度环境下。