2016肿瘤细胞凋亡实验攻略

细胞凋亡（Apoptosis）是为了维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡是一个的主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，而不是病理条件下，自体损伤的一种现象，主要是为了更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

工具/原料

Annexin V -FITC Apoptosis Dection kit,1X PBS,细胞，0.25%胰酶，2.0mL离心管，4℃冷冻离心机

微型台式真空泵，流式细胞仪

1.细胞处理：

1、将6孔板中的培养基收集到2.0mL的离心管中，每孔加1.0mLPBS洗涤细胞，聪艄料姹再加200ul的胰酶进行消化，具体时间视情况而定。

2、待消化好，加2ML的培养基终止消化，吹打细胞，将细胞混悬液加入2mL离心管中，4℃，1200r/min,离心5min，弃去培养液。

2.细胞染色：

1、用冷的PBS洗2次，然后用1X的结合液重悬细胞（1*10^6cells/mL），一般结合液加入体积500-800mL。

2、将100ul细胞悬液（1*10^5cells）转移至1.5ML离心管中。

3、加5uL的FITC AnnexinV和5ul的PI。

4、轻轻涡旋细胞且避光，常温25℃的条件下孵育15min。

5、每管加400ul的1X结合液。

3.流式分析

1、提前15min，打开流式细胞仪进行清洗；

2、进行样品测定区域的选择，并用正常的细胞进行调整电压，并进行设门。

3、开始测定样品，待测定完成后，进行分析，并进行保存，最后清洗仪器，待仪器清洗完成后关闭软件，最后关闭仪器。