实验技能：蛋白质的提取

提取细胞内蛋白质试讲组织细胞或培养细胞破碎，使细胞内的物质释放到缓冲液中的过程。

1.机械破碎法（匀浆）

1、利用机械力将细胞破碎。常用的设备：高速组织捣碎机，匀浆器，研钵等。不同组织的特性来选择不同的方法，动物的胰肝脑一般较柔软，用普通匀浆器研磨即可，而肌及心肌组织较韧，需预先搅碎成匀浆。

2.超声破碎法

1、利用震荡频率为15-25KHz的超声波在细胞液中产生的空化效应和机械效应将细胞膜破碎的方法，多用于细胞裂解。

2、注意事项：（1）为了避免在溶液中产生泡沫，要将超声探头完全置于液面以下，并不接触的溱碳叛鹤前提下尽可能靠近容器底部。（2）应该使用塑料试管，避免使用玻璃试管。（3）超声剂量应由样品量和菌体来决定，慧晕视巧攻率可以在200-600w。过强的超声波可导致多聚物降解和蛋白失活。如果超声出现沉淀说明超声功率太大。（4）一般超声5-10s，反复多次。（4）将试管置于冰水中以避免蛋白质变性和失活。

3.反复冻融法

1、将细胞在-20度以下或液氮条件下冰冻，室温溶解，反复多次。特点：成本低，操作简便，过程缓慢，但不适用于对温度比较敏感的蛋白质。

4.表面活性剂裂解及酶解法

1、自溶法：利用自身的酶将细胞破使细胞内物质释放出来。该法比较稳定，且蛋白不易分解。自溶过程中PH会有显著的变化。

2、酶融法：利用生物酶使细胞成分溶于溶剂中。

3、表面活性剂处理：通过破坏细胞膜磷脂双分子层将胞内物质释放出来。