口腔细菌显微观察实验方法

【实验目的】1. 巩固无菌操作技术，掌握细菌的涂片和单染色技术，了解口腔中的微生物及其观察方法。2. 学习细菌单染色操作技术。3. 用单染色法或负染色法观察口腔中的微生物。

工具/原料

胶头滴管

酒精灯

吸水纸

镊子

显微镜

蒸馏水、吕氏美蓝染色液（或石炭 酸复红染色液/ 黑色素液/ 碳素墨水）

香柏油

1. 单染色法

1、（1）涂片：在洁净磕聆霖麸无脂的载玻片中央滴一小滴无菌水，用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积约1~1.5cm。

2、（2）干燥：将涂片于室温中自然干燥。

3、（3）固定：手扶载屡阽咆忌片一端，使涂菌的一面向上，将载片通过微火2~3 次。在火上固定时，用手摸涂片反面，以不烫手为宜。不能将载片在火上烤，否则细菌形态毁坏。

4、（4）染色：将涂片置于水平位置，滴加染色液覆盖于涂菌处，染色约2min。

5、（5）水洗：倾去染色液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲在涂菌处，直洗至从载片上流下的水中无染色液的颜色为止。

6、（6）干燥：自然晾干或用吸水纸轻轻地吸干，注意不要擦掉菌体。

7、（7）观察：给载玻屡阽咆忌片滴一滴香柏油，将载玻片直接放在显微镜的载物台上，转动转换器，调至100 倍镜下，用手升高载物台，使玻片上的香柏油与镜头结合在一起，用眼睛观察。

2. 负染色法

1、（1）在洁净无油腻的载片的一端滴一小滴无菌水，用牙签取牙垢少许与水滴充分混匀，然后加少许黑色素溶液，充分混匀。

2、（2）另取一载片将其边缘放在含菌载片的一端，然后推向另一端，则含菌载片上的混合液被推成薄膜。

3、（3）于室温中自然干燥。

4、（4）镜检：将光线调亮，先用低倍镜观察，再用高倍镜观察。