SDS-PAGE法蛋白质的定性定量分析攻略

1、标准蛋白样品的制备：根据待测样品的理论分子量或根据其他参数选用适宜大小的蛋白质分子量标准。

2、待测蛋白质样品的制备：取蛋白质样品加入等体积2×SDS-PAGE上样缓冲液，混匀，在沸水浴中加热3min。

3、电泳分离与染薄本窭煌色：当电泳前沿（溴酚蓝指示剂）移动至胶边缘时，结束电泳，取下胶板，切去浓缩胶，将整块胶浸没在0.25%的考马斯亮蓝R-250中染色0.5-1h。取出凝胶，吹涡皋陕用水漂洗几次，然后加入脱色液，更换数次直至显现清晰的蛋白质区带。

4、蛋白质相对迁移率计算：Rf=蛋白质样品东的距离（cm）/指示染料移动的距离（cm）；分别求得标准蛋白和样品的Rf后，以分子量为纵坐标，Rf为横坐标，可以得带蛋白质分子量的标准曲线方程。将待测分子的Rf代入方程，可计算其分子量。